藥物入醫保大大提高了治療的可及性，極大減輕患兒家庭的經濟負擔的同時，也使得關鍵措施的早期篩查有了極大發展。今天就來聊聊ＳＭＡ。

０１　　什么是ＳＭＡ

脊髓性肌肉萎縮癥（Ｓｐｉｎａｌ　Ｍｕｓｃｕｌａｒ　Ａｔｒｏｐｈｙ，　ＳＭＡ）是一組以緩慢進行性加重、肢體近端對稱性肌無力、肌萎縮為主要臨床表現的常染色體隱性遺傳病。類似漸凍癥卻比漸凍癥更為嚴重，是２歲以下嬰幼兒的“頭號遺傳病殺手”。

ＳＭＡ是常染色體隱性遺傳病，攜帶率為１／５０～１／６０，發病率為１／６０００～１／１００００活產胎兒。如果父母均是攜帶者，而新生兒患病的概率為１／４。

０２　ＳＭＡ致病機制

ＳＭＡ與ＳＭＮ運動神經元存活基因（Ｓｕｒｖｉａｌ　ｏｆ　ｍｏｔｏｒ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｇｅｎｅ）相關，定位于５ｑ１３．２。

ＳＭＮ有２個高度同源拷貝ＳＭＮ１（ＯＭＩＭ　６００３５４）和ＳＭＮ２（ＯＭＩＭ　６０１６２７），兩者僅有５個堿基差別，其中２個堿基位于外顯子７、８，另３個堿基在內含子６、７中。

ＳＭＮ１基因７號外顯子純合缺失是ＳＭＡ的主要致病原因。在健康人中，該基因會產生運動神經元存活蛋白或ＳＭＮ蛋白，對控制肌肉的神經功能至關重要。如果ＳＭＮ１外顯子７缺失，則無法合成ＳＭＮ蛋白，導致神經細胞就無法正常運作并最終死亡，導致肌肉無力，進而影響人的日常生活甚至生命。

ＳＭＮ２基因拷貝數增加有利于ＳＭＡ癥狀減輕。每個人ＳＭＮ２拷貝數可能是０、１、２、３、或者４個。一個病人擁有的ＳＭＮ２基因拷貝數量越多，則他發病的時間越晚、病情越輕。

ＳＭＡ攜帶者的ＳＭＮ１基因型主要分為４種，患病基因型有３種。

備注：將攜帶１個ＳＭＮ１基因拷貝定義為１拷貝（１‐ｃｏｐｙ）；將攜帶２個ＳＭＮ１基因拷貝定義為２拷貝（２‐ｃｏｐｙ）。在致病等位基因中，將攜帶ＳＭＮ１　缺失或因轉換導致的ＳＭＮ１缺失定義為０拷貝（０‐ｃｏｐｙ）；將攜帶微小變異的ＳＭＮ１基因定義為１ｄ。

０３　　ＳＭＡ相關基因診斷技術

目前臨床主要的拷貝數檢測技術有ＭＬＰＡ和ｑＰＣＲ技術：

多重連接探針擴增（ＭＬＰＡ）：

ＭＬＰＡ方法針對ＳＭＮ１與ＳＭＮ２基因第７和第８外顯子堿基差異位點設計雜交探針，采用其他染色體位點的多個管家基因作為內參基因，以ＳＭＮ１∶ＳＭＮ２不同拷貝數的樣本作為平行對照，在完成雜交連接等系列反應后，根據熒光峰面積的比值比來判斷目標基因序列的拷貝數。

ＭＬＰＡ技術通過直接檢測ＳＭＮ１拷貝數，明確區分患者、攜帶者及正常人；還可同時檢測患者的ＳＭＮ２拷貝數，是目前國內外ＳＭＡ管理共識推薦使用診斷ＳＭＡ的金標準。但是該方法不能檢測ＳＭＮ１基因微小變異與ＳＭＮ１［２＋０］基因型。

熒光定量ＰＣＲ：

主要原理是通過多重實時熒光定量ＰＣＲ　反應，以管家基因序列為內參，采用Ｔａｑｍａｎ探針法分別對ＳＭＮ１基因第７和第８外顯子進行拷貝數相對定量，來判斷是否發生缺失變異。

該方法優勢是操作簡便、成本低廉，適用于人群篩查，但其特異性相比ＭＬＰＡ方法略遜，且ＳＭＮ２拷貝數需要另外設計探針進行檢測。同樣不能檢測ＳＭＮ１基因微小變異和［２＋０］基因型。

此外巢式ＰＣＲ，ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，ＤＨＰＬＣ，Ｓａｎｇｅｒ測序，數字ＰＣＲ，ＮＧＳ等技術也都在ＳＭＡ檢測中有應用，每種方法都有自己的優劣勢。

０４　　ＳＭＡ檢測市場容量

ＳＭＡ主要檢測主要針對人群為婚檢、孕檢以及新生兒等人群。現在每年大概１０００萬新生兒，每個ＳＭＡ檢測數百元不等（如深圳３５１元，青島６００元），粗略算下至少也是一個幾十億的市場容量。

０５　　ＳＭＡ檢測產品

從ＮＭＰＡ官網搜索，ＳＭＡ檢測共有３個產品取得注冊證。

１）上海五色石

五色石的運動神經元存活基因１（ＳＭＮ１）外顯子缺失檢測試劑盒　（熒光定量ＰＣＲ法）是在中國最早獲批的ＳＭＡ檢測產品，采用ＭＧＢ探針實時多重熒光定量ＰＣＲ的方法，使用人ＲＰＰ４０基因作為內標基因，分別對ＳＭＮ１基因第７外顯子和第８外顯子（目的基因）進行擴增并對拷貝數進行相對定量檢測，同時采用化學阻斷的方法控制運動神經元存活基因２對檢測結果的影響。

產品特點：

• 創新—國內首創，全球首次合法化認證

• 快速—近２小時可完成實驗，自動判讀、結果精準

• 經濟—通用技術平臺、樣本通量大、檢測成本低

• 安全—全程閉管操作、避免污染、人體無害

• 榮譽—２０１５年被ＣＦＤＡ評為“國內首創具有顯著臨床應用價值的創新醫療器械產品”

• 榮譽—首屆“創之星”杯中國體外診斷最佳創新產品（試劑），獲得　“一等獎”

• 榮譽—入選科技部《創新醫療器械產品目錄（２０１８）》

２）　天隆科技人運動神經元存活基因　１（ＳＭＮ１）　檢測試劑盒（ＰＣＲ－熔解曲線法）

該產品通過設計特異性ＡＲＭＳ－ＰＣＲ引物，并采用熔解曲線法分析，可以準確地定量檢測ＳＭＮ１基因第７、第８號外顯子拷貝數，實現ＳＭＡ患者的輔助診斷和攜帶者篩查。

方案優勢：

• 權威認證：獲得中國ＮＭＰＡ認證、歐盟ＣＥ認證。

• 結果精準：引物特異，結合熔解曲線分析，純合及雜合缺失皆可檢測。

• 操作便捷：采用自動化核酸提取，并基于熒光ＰＣＲ平臺，操作簡便，結果自動判讀。

• 經濟高效：相比ＰＣＲ－ＲＦＬＰ及ＭＬＰＡ等方法，檢測成本更低；２小時左右即可完成９６個樣本檢測。

• 安全可控：血樣全程閉管檢測，避免樣本污染檢測靶標定性檢測人基因組　ＤＮＡ　中第　７　外顯子和（或）第　８　外顯子

３）深圳會眾

人運動神經元存活基因１（ＳＭＮ１）檢測試劑盒（ＰＣＲ－熒光探針法）

該產品通過對ＳＭＡ致病基因ＳＭＮ１外顯子７的拷貝數檢測，可明確檢測患者、攜帶者、正常人的三種不同基因型。

產品優勢：

• 檢測快速：１小時出結果

• 防污染：ＵＮＧ酶防污染體系，防止氣溶膠污染

• 結果易判讀：ＲＱ值直接判讀結果

• 高通量：一次可檢測１－３８４個樣本

• 高靈敏度：檢測下限為２ｎｇ／μｌ

• 簡化配液：２種組份，試劑配制簡單

４）　貝瑞基因今年６月份貝瑞基因公告稱獲得用于檢測ＳＭＡ（脊髓性肌萎縮癥）中多種突變的引物組、試劑盒、方法和系統，主要包括構建三代測序文庫、基于三代測序檢測ＳＭＡ疾病相關基因突變等。據了解，這項發明專li是國際上首創的針對ＳＭＡ的三代測序解決方案。

０６　　寫在最后